Luciferase（3’UTR活性驗(yàn)證）
技術(shù)服務(wù)描述：
螢光素酶是理想的報(bào)告基因，因?yàn)椴溉閯?dòng)物細(xì)胞中不含內(nèi)源性螢光素酶，一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶。單報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)往往會(huì)受到各種實(shí)驗(yàn)條件的影響，而雙報(bào)告基因則通過(guò)共轉(zhuǎn)染的“對(duì)照”作為內(nèi)參為實(shí)驗(yàn)提供一基準(zhǔn)線(xiàn)，從而可以在最大程度上減小細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，使得數(shù)據(jù)結(jié)果更為可信。Dual-Luciferase雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)在細(xì)胞中同時(shí)表達(dá)螢火蟲(chóng)螢光素酶和海腎螢光素酶，兩者沒(méi)有種源同源性并對(duì)應(yīng)不同的反應(yīng)底物，故而沒(méi)有交叉干擾。得益于超強(qiáng)的光信號(hào)和超高的信噪比，本系統(tǒng)被廣泛用于miRNA靶基因驗(yàn)證。
由于miRNA主要通過(guò)作用于靶基因的3’UTR起作用，可以將目的基因3’UTR區(qū)域構(gòu)建至載體中報(bào)告基因luciferase的后面， 通過(guò)比較過(guò)表達(dá)或者干擾miRNA后，報(bào)告基因表達(dá)的改變（監(jiān)測(cè)螢光素酶的活性變化）可以定量反映miRNA對(duì)目的基因的抑制作用；結(jié)合定點(diǎn)突變等方法進(jìn)一步確定miRNA與靶基因3’UTR的作用位點(diǎn)。
常用載體：
Luciferase（啟動(dòng)子活性驗(yàn)證）
技術(shù)服務(wù)描述：
轉(zhuǎn)錄因子是一種具有特殊結(jié)構(gòu)、行使調(diào)控基因表達(dá)功能的蛋白質(zhì)分子，也稱(chēng)為反式作用因子。某些轉(zhuǎn)錄因子僅與其靶啟動(dòng)子中的特異序列結(jié)合，這些特異性的序列被稱(chēng)為順式因子，轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域和順式因子實(shí)現(xiàn)共價(jià)結(jié)合，從而對(duì)基因的表達(dá)起抑制或增強(qiáng)的作用。螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)（luciferase Assay）是檢測(cè)這類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子和其靶啟動(dòng)子中的特異順序結(jié)合的重要手段，其原理簡(jiǎn)述如下：（1）用靶啟動(dòng)子的特定片段替換報(bào)告基因質(zhì)粒（如pGL3-basic）的啟動(dòng)子區(qū)。（2） 將要檢測(cè)的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒與報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)。如果該轉(zhuǎn)錄因子能夠激活靶啟動(dòng)子，則螢光素酶就會(huì)表達(dá)，且其表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子的作用強(qiáng)度成正比。（3） 加入特定的底物，螢光素酶與底物反應(yīng)，產(chǎn)生螢光素，檢測(cè)熒光的強(qiáng)度可以對(duì)螢光素酶的活性定量，進(jìn)而判斷該轉(zhuǎn)錄因子能否與靶啟動(dòng)子片段發(fā)生作用 （及其作用強(qiáng)度）。
常用載體：
